消毒内镜微生物监测的操作方法

     目的是确定各种重要表面存在的活体微生物,包括层流工作台,实验设备(集菌仪),实验室人员。 二、方法:接触碟法、擦拭法 1、接触碟法:是将充满规定的琼脂培养基的接触碟对规则表面或平面进行取样,然后至合适的温度下培养一定时间并计数。消毒内镜微生物监测 适用范围:实验人员及实验台面等 接触碟:直径55cm 取样面积:约为25cm2 结果报告:CFU/碟 培养基:种类、培养条件、培养基质量同沉降菌监测 自制接触碟 与之接触碟(商品化) 三层严密包装,内层真空封装 高压灭菌+钴60辐射灭菌,确保产品无菌 培养基应具有极强的弹性、持水性,不会出现渗水现象。 2-8摄氏度保存,一般保质期半年 可根据客户需求在培养基中添加青霉素酶等催化酶,用于去除生产中产生的抗生素粉尘的抗菌性。 监测步骤: 1)从冷藏柜中取出接触皿,并恢复至室温。 2)将包装整体送入取样地点,在此过程中逐步去掉外面两层包装,zui后一层真空包装在操作间打开。 3)打开接触皿上盖,使培养基充分接触待测表面,必要使用手指轻轻按压接触皿外侧底部中心约10秒,轻轻抬起,将上盖从接触皿一侧小心盖上。 4)在接触皿磨砂区域标记取样地点、取样时间和取样人。 5)取样后的清理:用消毒剂或杀孢子剂擦拭测试区域,以消除培养基的残留。 6)将接触皿从洁净室取出,按规定的温度和时间倒置培养。 7)观察、计数 注意: 1)表面微生物检测要在实验结束后进行。 2)消毒剂残留物对监测的影响 测试表面接触时,接触皿往往会接触清洗或消毒洁净室的消毒剂残留物。数百种不同的杀菌剂用于世界各地的制药设施,事实上许多监管机构希望看到轮流使用不同消毒原理的两种消毒剂,这些不同的消毒物质会抑制接触板上污染物的生长。 为抵制这些消毒剂的生长抑制性质,中和剂被添加到培养基中。卵磷脂,聚山梨醇酯80,组氨酸和硫代硫酸钠的适当组合被认定能中和高达80%的常用消毒剂。 3)方法验证的问题 环境中分离的代表菌;代表性试验表明;回收率 4)取样部位 头部、口罩、肩部、前胸、前臂、手腕、腿部/靴子、眼罩 5)限度的理解:A级<1cfu/碟 举例:监测了4个部位(人员)

     (左上臂接近手腕处,右上臂接近手腕处、前胸、口罩外表面) 不合格结果:4个接触碟平均菌落数≥1cfu 2、擦拭法:采用合适尺寸的无菌模板或标尺确定擦拭的面积,无菌拭子取样后,拭子置合适的缓冲液或培养基中,充分振荡,再用适应的方法计数。是接触碟法的补充。消毒内镜微生物监测 浸湿液:通常为无菌生理盐水或0.1%的蛋白胨溶液约5毫升 培养基:TSA 计数法:平皿涂布法、平皿浇注法、薄膜过滤贴膜法 拭子头:材料类型包括聚酯、聚氨酯、尼龙和棉 棉签头:需要灵活、耐足够长的时间,达到难以达到的地点,如管道内部。 操作: 1、浸湿拭子:开启装有约为5ml的无菌浸湿液的小试管(到带有螺旋帽的),将拭子头部浸湿,紧贴管内壁转动,挤压出多余的溶液。 2、擦拭表面:拿住拭子柄与待测物表面成30度角,缓慢并全部涂抹待测物表面三次,没涂抹一次注意翻转拭子头的方向。 3、涂抹后折断拭子头放入浸湿液试管中盖上帽,充分振荡带拭子的试管10秒,取出1ml混悬液接种到灭菌平皿中。 4、浇注灭菌TSA培养基 ,培养,计数。 注意: 1)表面微生物检测要在试验结束后进行 2)消毒剂残留物对监测的影响 3)取样位置 4)取样方式 5)方法验证问题

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